Chapitre 1 — Introduction à l’histologie · Topic 2 : Les familles de tissus et les méthodes d’observation · Leçon 2.3
Comment passe-t-on d’un prélèvement à une image au microscope ? Cette leçon présente les microscopes (optique et électronique), les étapes de préparation des tissus (fixation, inclusion, coupe) et les colorations. C’est l’une des notions les plus « tombées » au concours.
🎯 Objectifs pédagogiques
À la fin de cette leçon, tu sauras :
- comparer microscopie optique et électronique ;
- distinguer ME à transmission et à balayage ;
- ordonner les étapes de préparation ;
- décrire la coloration HE ;
- citer le principe de l’immunohistochimie.
🧭 Plan de la leçon
- Les microscopes
- La préparation des tissus
- Les colorations
1. Les microscopes
L’histologie a commencé et continue grâce au microscope. On distingue la microscopie optique et la microscopie électronique.
| Type | Résolution | Grossissement |
|---|---|---|
| Microscopie optique (photonique, lumière blanche) | 0,2 à 0,5 µm | jusqu’à ×1000 |
| Microscopie électronique | quelques nm | > ×100 000 |
La microscopie optique équipe tous les laboratoires de morphologie ; on tend vers la numérisation des lames (lames virtuelles). La microscopie à fluorescence localise précisément des constituants par des marqueurs fluorescents ; la microscopie confocale réalise des images de très faible profondeur de champ dont l’empilement génère une représentation tridimensionnelle.
La MET révèle les ultrastructures intracellulaires (organites) en 2D ; la MEB montre la surface en relief (3D), sans accès au contenu intracytoplasmique. Combiner plusieurs techniques permet de comprendre toute la structure tissulaire.
2. La préparation des tissus
Avant l’observation, le tissu doit être préparé en plusieurs étapes successives :
| Étape | But |
|---|---|
| 1. Prélèvement | Frais (biopsie, pièce opératoire) ; à fixer le plus vite possible. |
| 2. Fixation (ou congélation) | Conserver le tissu, empêcher l’autolyse, durcir le prélèvement. Fixateur : le formaldéhyde (formol). |
| 3. Inclusion | Déshydratation (alcools croissants, puis toluène/xylène) puis inclusion dans un milieu hydrophobe : paraffine (MO) ou résine (ME) → on obtient un bloc. |
| 4. Coupe | Au microtome (ou cryostat, microtome à froid) ; coupes de quelques µm. |
| 5. Coloration | Augmenter le contraste ; il faut d’abord déparaffiner et réhydrater (colorants aqueux). |
| 6. Montage | Sur lames et lamelles, pour l’observation au microscope. |
Lors de l’inclusion, la déshydratation augmente le durcissement mais dissout la plupart des lipides. C’est pourquoi les adipocytes apparaissent « optiquement vides » sur une coupe classique : pour voir les lipides, on utilise des colorations spéciales sur coupe à congélation (noir/rouge Soudan).
3. Les colorations
Les colorations augmentent le contraste des structures. On distingue :
| Type | Principe / exemple |
|---|---|
| Colorations topographiques | Renseignent sur l’organisation des tissus. Bichromes (ex. : hématoxyline-éosine, HE) ou trichromes (ex. : trichrome de Masson HES, met le collagène en évidence avec le safran). |
| Colorations spéciales (histochimie) | Mettent en évidence des substances précises : PAS (dérivés polysaccharidiques), Soudan (lipides), orcéine (fibres élastiques). |
| Immunohistochimie | Utilise des anticorps pour repérer des protéines : couplés à un fluorochrome (immunofluorescence) ou à une enzyme (ex. : peroxydase). |
À connaître par cœur : l’hématoxyline (ou hématéine) est un colorant basique, qui a une affinité pour les acides : elle colore en violet/bleu les noyaux (riches en acides nucléiques). L’éosine est un colorant acide : elle colore en rose/rouge le cytoplasme.
Avant d’interpréter une photo, détermine toujours : le type de microscopie, le grossissement, le type de coloration, le type d’organe (plein ou creux) et l’incidence de coupe. L’observation va du faible grossissement (vue d’ensemble) au fort grossissement (détails cellulaires).
🧠 À retenir absolument
- MO : résolution 0,2-0,5 µm, ×1000. ME : quelques nm, >×100 000.
- MET (transmission) : ultrastructures, 2D, métaux lourds (uranyle, plomb). MEB (balayage) : surface en relief, 3D, ~10 nm.
- Préparation : prélèvement → fixation (formol) → inclusion (déshydratation + paraffine/résine) → coupe (microtome/cryostat) → coloration → montage.
- Déshydratation = lipides dissous → adipocytes « optiquement vides » (Soudan sur coupe à congélation).
- HE : hématoxyline (basique) → noyaux bleus ; éosine (acide) → cytoplasme rose. PAS = polysaccharides ; immunohistochimie = anticorps (fluorochrome/enzyme).
❓ Questions fréquentes
Quelle différence entre microscopie optique et électronique ?
La microscopie optique (photonique) a une résolution de 0,2 à 0,5 µm et un grossissement jusqu’à ×1000. La microscopie électronique atteint quelques nanomètres de résolution et des grossissements supérieurs à ×100 000, révélant les ultrastructures.
Quelles sont les étapes de préparation d’un tissu ?
Prélèvement, fixation (formol) pour empêcher l’autolyse, inclusion (déshydratation puis paraffine ou résine), coupe au microtome ou cryostat, coloration, et montage sur lame. C’est une notion très fréquente au concours.
Comment fonctionne la coloration hématoxyline-éosine (HE) ?
L’hématoxyline est un colorant basique qui a une affinité pour les acides : elle colore les noyaux en violet/bleu (acides nucléiques). L’éosine est un colorant acide qui colore le cytoplasme en rose/rouge. C’est la coloration de routine.
Pourquoi les adipocytes apparaissent-ils vides sur une coupe ?
Parce que la déshydratation, lors de l’inclusion, dissout la plupart des lipides. Les adipocytes apparaissent alors « optiquement vides ». Pour visualiser les lipides, on utilise une coloration spéciale (noir ou rouge Soudan) sur coupe à congélation.
Qu’est-ce que l’immunohistochimie ?
Une technique qui utilise des anticorps pour mettre en évidence certaines protéines dans les tissus. Les anticorps sont couplés soit à un fluorochrome (immunofluorescence), soit à une enzyme comme la peroxydase, qui catalyse une réaction colorée.
🚀 Pour aller plus loin
Les tissus sont posés et on sait les observer. Plongeons maintenant dans la matrice extracellulaire.
Contenu pédagogique original — Réussir SVT. L’équipe Réussir SVT.